ELISA法检测乙肝5项指标室内质控初探

翟蓉黄飞 孙劲

目前，市县级医院普遍采用固相酶联免疫法(ELISA)检测乙肝5项指标，该法操作方便、快捷，特别适合大批标本的筛查。但由于ELISA方法学特点，批内、批间的CV值较大。因此，做好该项检测的质量控制是保证结果真实可靠的基础现就本室开展此项室内质控若干措施和体会报告如下。

1．材料与方法

1.1仪器 RT-2100酶标仪(深圳雷度生产)，附雷度酶标信息管理系统外接软件，ST-36洗板机购自上海科华实验系统有限公司。

1.2 试剂 (1)乙肝5项试剂购自上海荣盛生物技术有限公司，批号：HBsAg(20051007)，抗-HBs(20050926)，其余三项皆为20050916。(2)乙肝质控血清购自卫生部临床检验中心，规格分别为0.5ng/ml和1ng/ml的HBsAg，30 mIU/ml 抗-HBS，2 Ncu/ml HBeAg,4 cu/ml抗-HBe和2 Ncu/ml抗-HBC。批号200501。

1.3 方法 乙肝5项指标操作严格按说明书要求进行。质控标本-20℃保存，临用前取出放置室温融化后和患者标本同时检测,剩余质控物-4℃冷藏续用，检验结果用酶标仪以主波长450 nm，次波长630 nm 比色，结果传至本地计算机并输出报告单．质控结果录入质控信息数据栏，连续记录3次结果便采用即刻法对第3次数据进行统计、图形绘出和质控提示，即受控、告警、失控。连续统计2O次在控数据后即改用该软件的ELISA法即均值法进行统计分析。

2.结 果

乙肝5项检验结果采用阴阳性报告并附带S/C0值，质控项目皆以S/C0进行统计分析，详见表1～5 (O.5 ng／ml HBsAg的S/C0值在0.5以下，故未作统计)。

3.讨 论

目前临床免疫推荐使用即刻法对乙肝5项指标进行室内质控，它根据Grubbs剔除离群值检验的方法演变而来，具体操作是连续检测3次数值就可以对第3次数值进行均值、标准差、变异系数统计，并根据公式Xn为测定值，为均值，s为标准差。)计算一组数据中的某个可疑数值的SI上限值或下限值，与SI界值表中的相应次序的2s或3s的界值进行比较。本室采用的是酶标仪附带的质控软件，能自动处理数据、自动绘图和对各项质控数据进行质控情况提示，较为方便。统计数据显示：1 ng/ml HBsAg和2 Ncu/ml的抗-HBc存在假在控现象，前者的最大CV值达到55仍在控，而凭经验应属于失控状态；后者则在数据累计至2O次后改用ELISA均值法发现有连续7次结果在x轴一侧的趋势性变化失控，即回顾性分析失控。这些与宋宏先等报道的“即刻法室内质控存在的问题”一致。即刻法室内质控假在控的原因分析：(1)前3次的检测结果的CV值大小对后续结果的影响很大，前3次的CV大，则后面的检测值即使出现较大的CV值亦显示在控；否则会出现假失控。本次统计CV值皆在15以上，故未发现有假失控的现象。陈慧英等采用改良即刻法进行免疫实验的质控数据统计，即以<25% CV值为控制限来判断在控与否，这样便能避免假在控结果的发生。(2)影响ELISA 法实验精密度除方法学本身的误差外，日常实验中酶标仪的性能、洗板的质量、操作者的质量控制意识都是重要因素。我们使用的酶标仪存在孔位效应，第一排的透光不稳定，标准差大；使用连续式检测方式，存在结果交叉干扰的现象，所以改用步进式检测方式，虽然检速慢，但能使稳定性相对提高；我们使用的ST-36W 洗板机没有蒸馏水清洗程序，使用中发现管道内容易形成絮片状的菌膜而不完全堵塞针头，这样显色背景明显加深，出现假阳性,因此每周用次氯酸溶液清洗管道1次，效果很好。另外，操作人员的质量控制意识也很关键：注意标本的收取、核对、离心与否，标本问交叉污染，结果的核对，特别是特殊模式的结果一定要用目测加以复核，这些均影响结果的准确性。因此，在实验中有效控制各种影响因素，是做好患者标本检测的有力保证，也是室内质控的最终目的。

综上所述，能将日常乙肝5项指标室内质控工作做好，除积极消除各种影响因素外，选用合适的质控品十分重要，因为乙肝5项指标为免疫定性试验，统计中发现阴阳性质控品的结果很稳定，如本次统计的全部阳性结果的抗-HBs和HBeAg及阴性结果的抗-HBc，而临界水平的结果就不稳定，如1ng/ml的HBsAg，即灰区水平，这对血站系统的献血者筛查尤为重要。因此，明确乙肝各项的具体实验室检测灵敏度，采用患者标本制备临界值质控品并能检测出符合允许CV值范围的室内质控结果，应是日后的工作重点。

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