D-二聚体质控品的制备

周丽艳 张志国 曲灿华 李亚疆 辛华 张文陆

D-二聚体测定是对DIC、原发性纤溶症、肺及静脉栓塞等疾病诊断、鉴别诊断及疗效观察的重要指标。在D-二聚体的测定过程中必须用室内质控品控制检测质量。目前国内应用的D-二聚体定量测定室内质控品均为国外进口产品，价格昂贵。我们创造性的利用凝血检测后剩余血浆，根据DIC发病机理，在体外试管中使其发生DIC样的反应，从而产生出大量的D-二聚体，并将其制成D-二聚体定量测定质控品，使成本降低近百倍。

一、材料

1．血浆：收集2004年1月7日-2月5日间本医院外科术前患者进行凝血项目检验后剩余血浆。选取凝血、乙丙肝、艾滋病、梅毒检测均为正常的无溶血、无乳糜、无黄疸血浆200毫升，＜-2O℃冰箱保存，备用。

2．试剂：尿激酶(黑龙江迪龙制药有限公司)，D-二聚体定量测定试剂盒(ELISA法，上海太阳公司)。

3．仪器：DNL-9602G型酶标仪(北京普朗公司)。

二、原理

血浆中加人钙离子使血浆复钙，玻璃试管壁激活内源性凝血系统使纤维蛋白原转变成纤维蛋白。这一步相当于DIC时广泛的微血栓形成期。在含有纤维蛋白的血浆中加人尿激酶，促进纤溶系统激活从而降解其中的纤维蛋白。纤维蛋白被降解产生纤维蛋白降解产物，其中含有D-二聚体。这一步相当于DIC时的纤溶亢进期。将含有D-二聚体的血浆稀释成合适浓度即制成了D-二聚体质控品。

三、方法

1．产生纤维蛋白：取新鲜血浆0.5毫升，加人生理盐水2毫升，混匀，加人30 mmol/L氯化钙0.5毫升，混匀，37℃水浴2小时，此时取出试管可见到液体中含有白色条索状的纤维蛋白。

2．产生D二聚体：将形成的纤维蛋白用竹签挑到另一含有0.5毫升新鲜血浆的试管中，加人尿激酶5000单位，混匀。37℃水浴2小时。取出时，血浆中的白色条索状纤维蛋白消失，即纤维蛋白已被降解，使其中含有了大量D-二聚体。然后将血浆56℃水浴0.5 h，灭活凝血、抗凝血、纤溶等各系统因子、酶类。

3．定值：将含有D二聚体的血浆用已收集的血浆进行100倍稀释，然后再将其稀释成不同倍数，应用ELISA法进行测定。我们最后选取再稀释15倍和7.5倍两个浓度，作为低、高两个浓度的质控品，测定结果分别是880 μg/L与2125 μg/L。

四、稳定性

1．冷冻保存：将880μg/L质控品置于＜-20℃冷冻保存，在一年期间测定了1O次，结果无明显改变(与定值880 μg/L比较，P＞0.05)。

2．冷藏保存：将复溶的质控品置于＜4℃冷藏保存，每天一次，连续测定8天，结果无明显改变(与定值880μg/L比较，P＞0.05)。由此说明其稳定性达到了室内质控品的要求。

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