酶联免疫吸附检测的质量控制

    酶联免疫吸附检测(ELISA)是免疫检验中最常用的方法之一。由于其方法上的特异性、灵敏性和操作上的简便性以及试剂的稳定性而成为免疫检验中的主要技术。尽管如此，在实验工作中，要使ELISA得到最准确的结果，必须严格选择试剂和严格按规程操作，并进行全面的质量控制。

1 试剂

1．1 试剂的选用试剂必须是国家批准检定或有生产批准文号的试剂。使用前先测定各孔空白的吸光度值，并计算平均值，所有单个读数与平均数之差应<10％。试验用的蒸馏水的质量也至关重要，不合格的蒸馏水可使空白值增高，最好使用新鲜重蒸馏水。

1．2 试剂的准备实验开始前，将试剂盒先从冰箱取出，在室温下放置20 min以上后再进行测定，使试剂盒在使用前与室温平衡，以满足反应微孔内的温度要求。

2 标本要求

2．1 标本应新鲜如有细菌污染，菌体内可能含有内源性HRP(辣根过氧化物酶)，会发生假阳性反应。标本放置过长，IgG可聚合成多聚体。在间接法ELISA测定中会导致本底过深，造成假阳性。此外，要避免标本出现严重溶血。因Hb中含有血红素基团，其有类似过氧化物活性，若血清中Hb浓度过高，则易于在温育过程中吸附于固相，从而容易与后面加入的HRP底物反应显色，造成假阳性。不能即刻测定的标本，应低温保存，避免反复冻融。同时，标本凝固不全，其残留的纤维蛋白原也易造成假阳性结果，应待凝固完全后再分离血清。

2．2 重视预防检验干扰类风湿因子、补体、高浓度的非特异性免疫球蛋白、异嗜性抗体、某些自身抗体、交叉反应物质等在日常的临床标本中，非常可能产生检验干扰，造成假阳性，也应加以重视。

3 检测方法标准化

    加样量要准确，不可太快。液体要加在孔底，避免加在孔壁上部，此区易导致非特异性吸附；试剂的加入除了滴加的角度要注意以外，速度的均衡也是质量保证之一；温育的温度和反应的时间要严格且水浴，可使温度迅速平衡；反应板不应叠加在一起，为防止蒸发最好封板；避免“边缘效应”，提高测定的重复性；洗板。对于ELISA来说，这是极其关键的一步。其目的是反应面中没有与固相抗原或抗体结合的物质，和在反应中非特异吸附于固相载体的干扰物质。所用洗涤液应按试剂盒要求显色。显色的时问一定要掌握好，时间不足或过久都会影响结果的准确性。而且需要尽量保证每批次试验的显色时间一致；ELISA的比色测定用酶标仪完成，相对可以得到可靠的结果。

4 质量控制

    包括分析前、分析中和分析后的质量控制。同时每次试验都要进行对仪器设备的维护、校准以及试剂的质检，操作程序要标准化。同时每次测试都要有空白、阴性、阳性对照和质控血清。空白、阴性、阳性对照的吸光度应在一定的范围内。弱阳性的标本应复查或稀释后复查，以排除前带现象。每批试验的质控血清必须能检出，并记录其s／co值，作出质控图，以便更深入的分析。

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