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在AMP的缓冲环境下，磷酸对硝基苯在碱性磷酸酶的作用下，可以水解成磷酸盐和对硝基苯酚。在一定底物浓度范围内,磷酸对硝基苯的水解产物对硝基苯酚会引起405nm处吸光度的上升，其上升速率与血清中碱性磷酸酶的活力成正比。
碱性磷酸酶
磷酸对硝基苯
+ H2O -----------------------→磷酸盐
+ 对硝基苯酚
三、标本：
四、病人准备：无特殊要求。
类型：标本最好是无溶血的血清或肝素化的血浆。血清应在收集后两小时内分离出来。避免使用含EDTA或草酸盐的血浆。
标本稳定性：血清中的ALP在15～25℃可稳定3天，如果分析延迟8小时以上，最好把血清冷冻。冷冻的血清在融解后会表现出血清值的显著降低。它的活性恢复到初始值的速率依赖于时间和温度。
五、仪器与材料:
仪器：奥林巴斯AU640生化分析仪
材料：上海科华生物工程股份有限公司的碱性磷酸酶试剂
试剂准备：上海科华生物工程股份有限公司的碱性磷酸酶试剂盒为即开即用的液体试剂，无需特殊准备。试验用试管的直径在12～16mm。
试剂组份：
参见试剂盒内说明书。
六、注意事项：
1．此试剂为体外诊断用。
2．不要入口，吞下有害。
3．如试剂空白吸光度值大于0.6或变混浊，请勿使用。
4．试剂使用后，及时旋紧瓶盖以防空气中的CO2对试剂的影响。
七、性能参数：
1．试剂空白：在波长405nm处，试剂空白吸光度应≤0.70A(光径1.0cm)。
2．精密度：批内变异cv≤4%；批间相对极差≤6%。
3．准确度：相对偏差≤10%。
4．试剂空白吸光值变化：ΔA/5分钟≤0.010A。
5．线性范围：要求试剂盒在样本浓度0~700U/L范围内，整个反应仍呈线性，r2≥0.995。
6．最低检测限：最低检测浓度至少应达到2U/L。
八、试剂的贮存：1.当保存于2～8℃，不开盖情况下至标签的失效期。
校准：
标准液的准备：这个实验不需要标准液。
质控：
在每一批标本中都应把至少2个浓度水平的质控品作为未知标本进行分析。
九、操作程序（逐步地）：
AU640开机
1．确认两瓶清洗剂有足够的量。
2．打开蒸馏水供应系统的阀门。
3．如果没有设定自动开机，请按分析仪器上的[POWER
ON]键。
4．确认打印机为开机并处于联机状态。
5．在[Start
Condition]屏幕，输入所需信息，并按F2退出。
6．如果要求输入密码，请输入密码。
7．确认仪器上的在线试剂的位置是否正确、数量（体积）是否充足，不足请添加并在系统状态中的试剂状态检查试剂。
8．在急诊台Wash1的位置的试管中加满一支1N
HCL的样品针清洗液。
9．ISE（电极）需要以下步骤定标：
A．在急诊台相应位置放血清/尿高和低值标准液。
B．在系统状态菜单选择ISE状态菜单。
C．选择F5，选定合适的定标条目。
D．定标完成后，确认斜率和因数是否在范围内。
十、开始分析:
1．把定标、质控、和标本架放在架子传送带上。
2．用鼠标点击屏幕最上方的[START
ANALYZER]图标。
3．点击F2退出键，退回到主屏幕。
十一、分析参数
|
Test
Name |
ALP |
|
Type : |
Serum
|
|
Sample:
Volume |
4 |
|
Dilution |
10 |
|
Reagents：R1
Volume |
200 |
|
R2 Volume |
50 |
|
Wavelength: Pri. |
410 |
|
Sec. |
480 |
|
Method : |
RATE |
|
Reaction
Slope: |
+ |
|
Measuring
Point 1:First |
15 |
|
Last |
25 |
|
Measuring
Point 2: First |
- |
|
Last |
- |
|
Linearity: |
15 |
|
No-Lag-Time: |
Yes |
|
Pre-Dilution Rate |
1 |
|
Min OD
L |
-2.0 |
|
Max OD
H |
2.5 |
|
Reagent First L |
-2.0 |
|
First H |
2.5 |
|
OD
Limit Last L |
-2.0 |
|
Last H |
2.5 |
|
Dynamic
Range: L |
0 |
|
H |
700 |
|
Correlation Factor: A |
1.0 |
|
B |
0 |
|
Normal
Ranges: L |
42 |
|
H |
140 |
|
Unit:
|
U/L |
|
Calibration Type: |
MB |
|
Formula: |
Y=AX+B |
|
MB Type
Factor: |
3433 |
完整的实验参数与操作程序可以在AU640用户手册中查到。
十二、计算：
无需手工计算，在37℃每个标本的结果自动以U/L打印。
报告结果:
参考范围：
|
温度 |
30℃（U/L） |
37℃（U/L） |
|
女性
男性 |
37-90
40-110 |
42-128
53-140 |
每个实验室应建立自己的参考值。
不正常结果的处理程序：
根据仪器参数的正常值会打印异常标志。
报告格式：
自动地打印37℃U/L的报告。
十三、操作过程注意事项：
操作过程的限制性：上海科华生物工程股份有限公司的碱性磷酸酶试剂盒的线性范围是0～700U/L。样品浓度超过线性上限应稀释重做。样品浓度超过线性上限应稀释重做。在AU640中应用自动重做功能，标本稀释重做后会自动乘以稀释倍数。
十四、参考文献：
1.Clin. Chem. 21,
(1975)1988.
2.J. Clin. Chem.
Biochem. 21, (1983)731. |
