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HIV检测技术在监测中应用的指南：选择、评价和应用

联合国艾滋病规划署/世界卫生组织全球艾滋病/性病监测工作组

Guidelines for Using HIV Testing Technologies in Surveillance

UNAIDS/WHO Working Group on Global HIV/AIDS/STI Surveillance

来源：检验医学专题网     加入日期 2007-12-15

特别感谢WHO的Dr. Gaby Vercauteren和Dr. Susan Best及CDC的Dr. Mark Rayfield和Tim Granade先生所提供的技术支持，以及对初稿关键性的审阅。

位于华盛顿的美国国际发展署（USAID）全球局的人口、健康和营养中心对指南的开发提供了支持，从而使这项工作能够顺利进行。

World Health Organization and Joint United Nations Programme on HIV/AIDS, 2001

WHO/CDS/CSR/EDC/2001.16          UNAIDS/01.22E          ISBN 9173-92-063-7

本指南不是WHO和UNAIDS的正式出版物，但享有保留版权。但如果不是用于商业目的，可以任意对本文部分或全部内容进行综述、摘录、复制和翻译。本出版物中作者所表达的观点由其本人负责。

 正文中所提到的某些公司或某些制造商的产品并不意味着这些公司的产品较其他尚未提及的公司的产品优先得到WHO或UNAIDS认可或推荐。除非错误和遗漏, 所有专利产品名称的字头均大写, 以示区别。

目录

执行摘要

1.0 引言  

2.0 HIV血清学监测中HIV检测概述

2.1 HIV检测的目的

2.2 HIV检测方法

2.3 调查的人群

2.4 HIV感染发生率的测量

3.0 HIV检测使用的标本

3.1 标本的选择 

3.1.1   全血、血清和血浆的优缺点

3.1.2   尿液和唾液的优缺点

3.2 血液标本的收集、处理和贮存

3.2.1   全血、血清和血浆

3.2.1.1 对静脉抽血方法收集的血液进行处理

3.2.1.2 对静脉抽血方法收集的血清和血浆进行贮存

3.2.1.3 收集指尖血

3.2.1.4 HIV检测用干血滤纸片的制备和贮存

3.3 尿液和唾液的收集和贮存

3.3.1   尿液和唾液的收集

3.3.1.1 尿液

3.3.1.2 唾液

3.3.2   尿液和唾液的贮存

3.4   标本的编码和记录

3.4.1   标本的编码

3.4.2   标本的记录

4.0 目前在监测中使用的HIV检测技术和策略

4.1 HIV检测技术

4.1.1   HIV检测概述

4.1.2   酶免疫测定（EIA)

4.1.2.1 一般描述

4.1.2.2 EIA的特性

4.1.2.3 EIA的操作

4.1.3   快速试验

4.1.3.1 一般描述

4.1.3.2 快速试验的特点

4.1.3.3 快速试验的操作

4.2 用于监测的HIV检测策略

5.0 对用于HIV监测的HIV检测技术的选择与评价

5.1 如何选择检测方法

5.2 对选择的检测方法的国家评估

6.0 实验室质量保证与安全

6.1 国家质量保证

6.2 实验室质量保证

6.2.1   分析前阶段

6.2.2   分析阶段

6.2.3   分析后阶段

6.3 安全规程

附件:医疗卫生场所预防HIV、乙肝病毒及其它经血传播病原体传播的普遍防护原则

词汇: 

参考文献: 

执行摘要 

由于HIV流行给全球带来了越来越严重的负担， 因此, HIV的监测将显得尤为重要。通过这样的监测工作, 从而能够对流行的趋势加以了解, 并对有效的预防作出正确的决策。在发展中国家更是如此，大多数HIV新感染和持续感染者是分布在这些国家。为了帮助各国根据本国的流行状况（低流行、集中流行和广泛流行）, 针对性地开展监测活动，世界卫生组织(WHO)和联合国艾滋病规划署(UNAIDS)已经建立了一个改善HIV监测的理论性框架－第二代HIV监测。第二代HIV监测指南提出了一些措施，旨在更好地利用监测的资料来提高和改进对HIV流行的对策。由于生物学监测(血清学监测)是大多数HIV监测活动的重要组成部分，因此，对现有的HIV检测技术的了解是非常重要的。

针对于第二代HIV监测，这些实验室指南提出了如何根据国家实验室的条件和监测需求来选择、评价和应用HIV检测技术与策略。该指南对标本的选择、收集、贮存和检测，以及对适当的HIV检测策略和技术的选择与评价提出了推荐性的建议，以满足监测的目的。同时在指南中也强调了质量保证的问题。

本技术指南是为发展中国家HIV监测的协调人员, 以及其他为监测目的而参与HIV检测的卫生专业人员所编写。它们是针对第二代HIV监测系统所开发的系列性操作指南中的一部分。

1.0 引言

概要

本指南中涉及的问题

标本的选择、收集、贮存和检测

HIV检测技术和策略

检测方法的选择和评价

质量保证措施

UNAIDS和WHO建议采用第二代HIV监测策略以改善对艾滋病预防与控制所需资料的收集、分析和使用。促进第二代HIV监测的利用也有助于各国和国际机构对HIV流行状况的监控, 并指导他们的防治实践（UNAIDS/WHO 2000）。使用第二代HIV监测方法，其监测系统应当是灵活的，可以随着国家的需求及流行状况: 低流行、集中流行和广泛流行（框图1）的不同而有所改变（UNAIDS/WHO 2000）。如果一个国家是按照第二代HIV监测的原则来建立和加强他们的监测规划，那么他们所收集的监测资料将可以更好地用于上述目的。

框图1. 三种不同的流行状况

低流行：该流行状况为尽管HIV感染状况可能已经存在多年，但在任何人群中该感染从未达到明显的程度。（任何人群中的HIV感染率均未超过5％。）

集中流行： 该流行状况为HIV在特定人群中已迅速传播，但在一般人群中未形成流行。（至少在一个特定人群中HIV感染率持续>5％，但在城市孕妇中<1％。）

广泛流行：该流行状况为HIV在一般人群中形成了明确的流行。（孕妇中HIV感染率持续>1％。）

第二代HIV监测依赖于生物学监测（血清学监测）、行为监测和其它来源（如HIV/AIDS病例报告、死亡登记、性传播感染监测、结核病监测）所获得的资料来描述一个国家的HIV流行状况, 并作出有效的反应。其目的是改善这些不同来源资料的综合利用, 同时也有助于对新的流行病学方法进行不断的探讨，对流行状况估计与预测的方法加以不断的改进, 以及更好地利用资料进行政策倡导、规划、督导和评估。

HIV血清监测资料可以用来估计HIV患病率和地区分布，监测特殊人群HIV流行的时间变化趋势，以及确定处于感染高危状况的人群。这些信息将用来帮助国家制定HIV策略和确定优先领域、计划和评价预防项目，以及评估国家对流行状况加以控制的效果。

由于生物学监测是地方或国家确定HIV患病率的基本方法，因此准确的HIV检测对第二代HIV监测是非常重要的。随着免疫诊断学的发展，HIV检测技术已经有了巨大的发展。目前提供的酶免疫测定（EIA）方法比前几代EIA更为准确，并且最新一代的HIV快速试验可以在具备很少经验和不需要使用仪器设备的情况下45分钟内提供与EIA相似的结果。这些快速试验使那些在过去无法开展检测的地区(如实验室资源有限的地区)现在可以开展HIV监测所需的检测，以及那些接受不到临床服务、难以接触到的目标人群(如暗娼)现在可以得到检测。

本指南为标本收集的种类、贮存和检测方法提供了指导。同时介绍了由WHO基于HIV患病率和现有用于生物学监测的HIV检测技术所推荐的HIV检测策略。该指南还包括了与诊断性检测的策略和技术相关的信息，因为诊断性检测所获得的资料也可以作为监测信息的来源。指南中描述了如何选择和评价适合不同国家流行状况和不同需求的检测方法。由于准确的检测结果对于HIV的生物学监测是至关重要的，因此也重点讨论了质量保证措施的问题。指南的最后列出了正文中所用的词汇。这些技术指南是为发展中国家的 HIV 监测协调人员和其他为监测目的而参与HIV检测的卫生专业人员所编写。它们是第二代HIV监测指南中的一部分。

2.0  HIV血清学监测中HIV检测概述

概要

HIV血清学监测中HIV检测概述

HIV检测的目的

      监测

      诊断

HIV检测方法

      无关联检测

      关联检测

调查的人群

为了对本指南有一个全面的了解，对开展HIV检测的目的、血清学监测中采用的各种检测方法及检测的人群有所了解是非常重要的。

2.1 HIV检测的目的

HIV检测可以用于监测、诊断或血液筛查（UNAIDS/WHO 1998）。在发展中国家，绝大多数以监测为目的HIV检测是作为不同人群血清感染率调查的一部分，这些人群包括诸如产前门诊孕妇、性病患者、暗娼或静脉吸毒者。此外，用于诊断目的（如自愿咨询和检测门诊）和血液筛查目的（如献血者）的检测结果，以及在其他人群（如征兵者）中常规检测的结果可以为监测目的提供额外的感染率资料。这些来自诊断性检测、血液筛查和其他人群常规HIV检测的资料不可以外推到一般人群，因为这些资料存在内在的偏倚。  

2.2 HIV检测方法

为血清学监测而选择的HIV检测方法取决于多种相关因素，如国家政策、流行状况、HIV检测的适宜人群和场所。无关联匿名的HIV检测（非知情同意）通常只有在门诊常规收集血液用于其他目的（通常为梅毒检测）的情况下才采用（框图2）。如果可能的话，这样的检测应该在有条件提供自愿咨询检测与转诊的诊所中开展。如果标本的收集单纯是为了HIV检测，最好在知情同意的情况下进行关联检测（保密或匿名），例如，在门诊无法接触到的人群（难以接近的人群，如静脉吸毒者、暗娼、男性同性恋者）中开展HIV监测（框图2）。如果标本的收集仅是为了HIV检测，也可以采用知情同意原则下的无关联匿名检测，这取决于国家的相关政策和指南。

当需要知情同意时（框图2），必须按照各国的相关政策和指南在HIV标本检测前进行。在采用知情同意的情况下，参与性偏倚是一个重要的问题，分析时应该进行评价并加以考虑。

对每份HIV检测的标本都要进行编码。编码的目的是为了在检测过程中区分不同的标本。对每份标本来说，编码是唯一的，它可以与个人的身份信息（如姓名、临床识别号）关联或无关联，这完全取决于所进行的HIV检测是关联的还是无关联的。编码可以与人口学特征（如年龄、性别、婚姻状况、居住地）（在关联和无关联检测中）及高危行为方面的信息（在关联检测中）相关联。这些信息是在标本收集的同时一起收集。

框图2. 关联和无关联的HIV检测

无关联匿名检测（非知情同意）

对其它目的而收集的无关联标本进行检测

不记录个人身份信息或姓名，不需要知情同意和咨询

对标本进行编码

无关联匿名检测（知情同意）a

对单纯监测目的而收集的无关联标本进行检测

需要知情同意b

不记录个人身份信息或姓名，不需要咨询

对标本进行编码

关联保密检测（知情同意）

需要知情同意b及检测前后咨询

需要记录个人身份信息或姓名

对标本进行编码，编码与个人的身份信息相关联

关联匿名检测（知情同意）

需要知情同意及检测前后咨询

不记录个人身份信息或姓名

对标本进行编码；将编码告知病人，因此，只有病人能够将编码与自己的检测结果相关联

a.UNAIDS/WHO全球HIV/AIDS/STI监测工作组对该方法的使用进行了描述，其在HIV监测工作中的应用应该遵循本国的国家政策。

b.知情同意是基于这样的原则，即有能力的人有权利针对医疗服务提供者与患者之间的这种专业上的关系对某些事件的参与和认可作出自己的决定。知情同意确保了个人在选择上的自由，以及尊重了他/她们的自主权，特别是有关对他/她们的身体与健康有影响的决定。（摘自WHO/全球艾滋病规划1992）

非知情同意的无关联匿名检测（图2.1）只有在临床上为其它目的(如产前门诊梅毒检测)而收集血液时才采用。在进行HIV检测之前必须将标本上所有关于血液来源的信息去掉。这样，检测结果就无法追回到患者，进而也就无法向患者反馈检测结果。

*工作人员1和2不应该是同一个人，这样可以使患者的匿名得到保证。

为了在门诊和实验室确保病人的匿名， 必须由一名工作人员收集标本，由另一名工作人员进行检测。一名工作人员（临床医生或实验室技术人员）应当负责收集和处理用于临床常规检测和HIV无关联匿名检测的标本。对无关联匿名HIV检测标本的处理需要移出一份血置于另一个试管中, 并编上与任何个人信息无关联的新编码，由另外一名工作人员进行无关联匿名HIV检测。

在某些情况下，一名工作人员（实验室技术人员）既负责收集标本又负责无关联匿名检测。在这种情况下，建议由另外一名工作人员进行无关联匿名检测标本的处理(即移出一份血置于编有新编码的新试管中，该新编码与任何个人信息无关联)。

在收集标本的时候，一名工作人员收集病人的人口学信息（如年龄、性别、婚姻状况、居住地）及病史。这些信息记录在临床表格中，并在标本上编码（如姓名、临床识别号）。针对无关联匿名HIV检测对标本进行处理后，将该标本重新编上新编码，同一名工作人员将新的编码登记在监测表格上，并摘录必要的人口学信息（如年龄、性别、婚姻状况）。这样，所摘录的信息就不会与任何个人信息相关联。无关联匿名HIV检测结果将通过新编码与人口学信息相对应，供分析。重要的是如果收集的人口学信息太多，则会识别出个体，从而不能保证标本的匿名性。

在血液标本不能作为其他目的而收集的情况下，采用非知情同意的无关联匿名检测被认为是不符合伦理学原则的。因此，在这种情况下，应当提供关联检测，并给予免费的自愿咨询和检测服务。如果国家政策允许，应采用知情同意的无关联匿名检测。

在采用知情同意的无关联匿名检测时，要询问参加者是否同意参与HIV监测项目，并且告诉参加者由于标本上不存在任何个人的信息，所以HIV检测的结果将是无关联的, 因此，将无法追回到哪个参加者具有阳性检测结果。应当向参加者提供免费的检测和咨询服务。任何人都可以拒绝参加该项目，因此可能会产生参与性偏倚。

关联检测（图2.2）涉及到HIV检测结果与被检测者之间的关联，被检测者可以得到自己的HIV检测结果。这种方法需要获得知情同意并提供检测前后的咨询。临床上可以是或可以不是关联检测。关联检测可以是保密或者是匿名的。由于被检测者可以得到HIV检测结果，关联检测需要附加HIV的确证试验。

在进行关联保密检测时，被检测者同意进行HIV检测，但需要保证检测的结果是保密的，并且只有规定的卫生服务人员可以知道结果。 HIV检测结果可以通过与个人信息相关联的编码与被检测者对应起来。在关联保密检测时，一名工作人员负责在标本收集前获取知情同意和提供检测前咨询，然后对标本进行编码，该编码可以与个人身份信息（如姓名和临床识别号）相关联。在关联保密HIV检测后，将检测结果告知被检测者，同时提供检测后咨询。

在关联匿名检测时，被检测者同意接受HIV检测。标本收集和处理的方法与关联保密检测相同，但标本的编码不与被检测者个人身份信息相关联，只有被检测者本人才能将检测结果与自己对应起来。

2.3 调查的人群

HIV的流行状况决定了要在哪些人群中进行调查。在HIV广泛流行的国家，主要是在产前门诊孕妇中开展哨点血清学监测，以此作为监测系统的基础。血清监测主要在大的诊所、医院的门诊部或卫生中心开展。在HIV集中流行或低流行的国家，主要是在一些被认为处于感染高危状况下的特殊人群（如暗娼及其嫖客、静脉吸毒者或男性同性恋者）中进行。因此，这类人群活动的场所被选为哨点。这些哨点可能包括性病诊所、戒毒中心、教养所、妓院、酒吧及俱乐部。调查的其他人群可以包括（1）入伍征兵者或军人，以及(2)感染危险性较高的职业人群，如工厂工人、煤矿工人和流动人口。在这些人群中所获得的感染率只适用于被调查人群本身，不适用于一般人群。

建议

如果处于HIV广泛流行，产前门诊是首选的监测哨点。

如果处于HIV集中流行或低流行，监测系统应当重点放在高危人群中（如暗娼及其嫖客、静脉吸毒者和男性同恋者）。

有关在开展HIV监测活动中如何选择和抽取合适人群与哨点的深入讨论超出了本指南涉及的范围。

2.4 HIV感染发生率的测量

一种对HIV试验加以改良的称为“增敏检测方法”（detuned assay）或“近期HIV阳转标准检测流程（STARHS）”目前只是用来作为测量HIV感染发生率（新HIV感染率）的研究手段。在任何国家，这类方法均未获准作为非研究目的加以应用。然而，由于这些方法在现场监测中的应用目前正处于开发阶段，所以在这里加以简述。

应用STARHS可以确定一个HIV感染者是否在近期被感染。特别是它能够指明一个人是否在检测前的平均大约130天内发生血清阳转（产生HIV抗体）（Janssen等，1998）。这种能够区别新旧感染的能力使得可以通过一次横断面调查来估计目前的HIV发生率。这种HIV发生率的估计对于评估目前HIV感染的趋势是十分有价值的。

3.0 HIV检测使用的标本

概要

HIV检测的标本

标本的选择

      全血、血清和血浆的优缺点

      尿液及唾液的优缺点

血液标本的收集、处理和贮存

尿液及唾液的收集及贮存

标本的编码和记录

借助于HIV检测技术，多种类型的标本可以用于HIV生物学监测：全血、血浆、血清、唾液及尿液。选择什么样的标本取决于后勤状况、确定的监测人群和哨点，以及HIV检测策略。标本必须采用适当的方式收集、检测和贮存，以便能够获得准确和可信的结果。

对于血清学监测来讲，在地区或国家实验室进行HIV检测前通常需要对标本进行收集和贮存。血清、血浆和干血滤纸片可以贮存起来，以后再进行检测。贮存的要求取决于标本的种类。

在当地不能进行检测的标本需要运送到地区或国家实验室进行检测。运送标本的方法取决于各国的基础设施情况。少数国家具备连接卫生服务机构与实验室之间的运送系统。大多数情况下，是由现场监测人员自己将标本从当地运送到国家实验室。

3.1 标本的选择

3.1.1 全血、血清和血浆的优缺点

全血、血清和血浆可以通过静脉抽血或指尖扎针的方式收集（见3.2），这些瓯驹贖IV检测中的优缺点如下：

优点

HIV抗体的浓度比尿液和唾液高（Rose等，1997）。

可以使用同份标本，加到常规检测(如梅毒、乙肝、丙肝)中。

可以用来进行专题研究（如HIV分型［HIV1和2］、HIV亚分型、抗逆转录病毒耐药研究）。

在具备实验室，并且有经过培训的采血人员的情况下，则可以容易地在临床开展标本的收集和检测。

在非临床场所也容易开展标本的收集（指尖全血）。

缺点

需要侵入性采血技术。

需要有经验的实验室人员（进行血清和血浆的收集与处理）。

与尿液和唾液相比，需要更多的设备（如针头、试管或三棱针等），以及生物有害物的处理装置。

如果需要静脉抽血的话，在非临床场所难以开展血清和血浆的收集。

与唾液相比，对卫生工作者和实验室人员来说，明显增加了职业暴露的危险，因为不仅血液中抗体浓度较高，而且标本收集时需要使用尖锐器具。

3.1.2 尿液和唾液的优缺点

除了血液及血液成分外，其它一些标本也可以用于HIV检测。在知情同意的关联检测中，可以采用唾液。除血液之外，在部分临床诊所，尿液是无关联匿名检测中常规收集的唯一其它标本。

优点

在标本收集和处理方面，不需要经过培训的技术员。

不必要接触可能有污染的实验室器材，如用过的针头或三棱针。这些污染物需要有生物有害物的处理装置。

唾液可以在各种现场条件，包括非临床场所进行收集。

对于难于接近的人群，收集唾液要比静脉抽血或指尖采血更容易被接受。因此，可能会有更多的目标人群愿意接受检测。

缺点

尿液EIA检测的敏感度和特异度低于用血液进行的检测（Martinez 等，1999）。

尿液标本必须在实验室中进行检测（EIA）；目前尚无快速试验方法可以提供。

唾液标本收集可能需要特殊的设备。

目前可以用于这类标本检测的手段是有限的。

与血清或血浆相比，费用可能更高。

可能需要额外备一份标本（血样）用于确证。

不能为专题研究进行额外的检测（如HIV1与2、HIV亚分型、抗逆转录病毒耐药检测）。

建议

血液（全血、血清和血浆）是检测的首选标本，因为其HIV抗体浓度比尿液和唾液高。同时该类标本还可以进行其它的常规检测，包括梅毒、乙肝和丙肝，以及用于HIV分型、亚分型及抗逆转录病毒耐药的专题研究。

3.2 血液标本的收集、处理和贮存

3.2.1 全血、血清和血浆

用于HIV检测的血液可以通过静脉抽血（全血、血清、血浆）或通过指尖采血（全血）进行收集。

3.2.1.1 对静脉抽血方法收集的血液进行处理

按照当地临床或实验室操作规程，以静脉抽血的方法收集血液。参见附件及6.3部分中有关安全规程的内容。

对于以静脉抽血方法收集的血液，建议按照下列步骤进行处理（国家临床实验室标准委员会［NCCLS］1998）：

1. 收集病人静脉血10ml，置于10ml的无菌试管中。

用于血清分离时，将血液置于红色盖子的试管中（不加抗凝剂）。

用于血浆分离时，将血液置于粉色盖子的试管中（加入抗凝剂，如EDTA）。

出于安全考虑，建议采用真空血液收集系统（如Vacutainer管）。（注：在常规血液收集过程中，额外采集一份血，纯粹用于无关联匿名检测被认为是不符合伦理学原则的，且建议不使用。）如果对收集的血液标本不考虑或无法立刻进行处理（如没有离心机），则将血液置于含有EDTA的粉色盖子的试管中。将血液静置20－30分钟，然后用移液管小心吸出血浆，不要吸出过多的红细胞。在24小时内对标本进行处理（见步骤3）和检测以防标本的溶血。这时也可用抗凝血制备成干血滤纸片。

2. 对标本进行离心以分离血清（在不含EDTA的试管中）或血浆（在含EDTA的试管中）。如果收集血液用于血清分离，则将血液静置20－30分钟，这样在离心之前就会形成血凝块。一般情况下，标本应当在300－400g或1200－1500转/分下离心10分钟（Lennette等，1985）。

3. 在标本离心后或放置足够时间使其分离后，用干净的移液管（不要采用倾倒的方法）吸取上清液0.5-2.0ml，移入另一个无菌的标有编码的试管中（塑料管，不是玻璃管）或离心管中（1.5-2.0ml，带螺盖），拧紧瓶盖。标本即可用于贮存和检测。

3.2.1.2对静脉抽血方法收集的血清和血浆进行贮存

贮存血清和血浆时，要考虑以下方面（NCCLS 1990）:

确保标有编码的离心管或塑料管盖子拧紧。（不要用玻璃管贮存标本）。将离心管置于分格插入式的冰冻盒内。

如果要将标本运送到开展检测的实验室，应立即将冷冻盒立式放入含有冰袋的冷藏箱内，以便在冷藏箱内能够保持4℃环境。如果没有冰袋，血清标本可以在室温下贮存3天。室温下放置更长的时间可能会导致细菌过度生长和标本的破坏。

如果在运往检测实验室前标本在收集地的贮存时间超过3天，应将标本冻存在－20℃的无霜冰箱中。对于长期保存，最好是将标本贮存在－70℃的无霜冰箱中。

控制冻溶次数，不要超过5次，因为多次解冻会影响抗体水平进而影响检测结果。

3.2.1.3 收集指尖血

通过指尖扎针收集的血液可以用来进行快速试验或在滤纸上制成干血滤纸片。在农村或非临床场所也许干血滤纸片更为首选。这些地方通常没有经过培训的抽血人员和缺乏具备适当设备（如离心机）的实验室。

1. 指尖采血时，先按摩手指（最好是中指和无名指），这样可以使血液集中在指尖。

2. 用70％的异丙醇清洁（擦洗）指垫（不要只清洁指尖或手指侧面）。用消毒棉签擦去酒精。

3. 用消毒的三棱针用力扎指垫。用消毒棉签擦去第一滴血，然后收集随后的血液置入快速试验的设备中或滴到滤纸上制成干血滤纸片。如果第一次扎针力量不够，不要再在同一处采血，需要换另一处或其他手指采血。不要吮吸或挤压针刺部位，因为这样会导致标本溶血，从而导致检测结果的不可信（NCCLS 1999）。也可以用耳垂替代手指采血。

3.2.1.4 HIV检测用干血滤纸片的制备和贮存

指尖或耳垂针刺收集的血液可以用来制备干血滤纸片（George等，1989）。尽管指尖采血是最为典型的采血方法，但也可以利用含抗凝剂的试管所收集的血液来制备干血滤纸片（NCCLS 1997）。干血滤纸片具有易于运输，且不需要冷链的优点。

1. 将直接采自指尖或用移液管吸取的血液置于特殊的滤纸上（Schleicher和Schuell Grade 903滤纸或Whatman BFC 180滤纸）。滤纸上可能有一个事先印好的圆圈，血液填满整个圆圈则表明含有100祃血液。如果滤纸上没有印好的圆圈，那么，需要在滤纸上制备一个直径为1.5cm的血斑。让血液浸透并填满整个圆圈。注意：如果血液没有浸入滤纸，该滤纸则不能使用。

2. 血液浸透滤纸之后（整个圆圈浸满），在滤纸的一侧标上编码。

3. 将圈内浸满血液的滤纸条悬挂起来，以便在干燥过程中滤纸四周可以通风。用于放置滤纸条的底座可以商品化提供。但是，也可以通过将两本书放在桌面或实验台上，然后将滤纸条放在两本书之间进行干燥（将滤纸条的边缘用胶带粘在书上），这样可以使得滤纸上的血液部分不与桌面或实验室台面接触。确保胶带不要贴到血斑上。

4. 让血液滤纸片于室温下自然干燥至少4小时（在潮湿气候下至少24小时）。不要加热血片或将他们堆叠在一起，干燥过程中不要与其它界面接触。

5. 在血片充分干燥后，将滤纸条包在玻璃纸或塑料纸里，避免滤纸之间标本的污染。

6. 将包裹好的滤纸条置于一个密封的袋子中，在袋子内放上干燥剂及湿度指示卡。每个袋子可放入大约20条滤纸条。该密封的袋子可以在室温下放置长达30天，在4℃下贮存长达90天。如果密封袋中的干血滤纸片需要贮存90天以上，则应贮存在－20℃条件下（George等，1989）。也已表明，正确贮存的干血滤纸片可以在至少2年内保持稳定。密封袋应当放在坚固的包装中进行运输（Knudsen等，1993）。

3.3 尿液和唾液的收集和贮存

3.3.1 尿液和唾液的收集

对于标本的收集，应遵循检测说明以及当地实验室操作规程。参见6.3部分中有关安全规程内容。

3.3.1.1 尿液

目前有多种用于尿液标本检测的EIA方案，但是，尚无供尿液标本检测的快速试验。

在收集尿液过程中，需要考虑的是：

在使用以尿液为标本的EIA检测试剂盒时，通常至少需要200祃的尿液。

可以在一天当中的任何时候收集尿液，不需要收集中段尿。

可以加入一些防腐剂便于贮存，尽管并不一定需要。

3.3.1.2 唾液

唾液可以用于改良EIA检测和快速试验检测。唾液的快速试验目前尚处在现场评价阶段。

标本收集的一般步骤如下：

1. 将一个经过特殊处理的吸附垫置于塑料棒上(通常由试剂盒生产厂家提供)。

2. 将吸附垫置于被检测者的口腔内颊深处，放置的时间见生产厂家的说明书。然后将吸附垫放入含有防腐液的小瓶中(通常由试剂盒生产厂家提供)。

由于检测的复杂性，供EIA检测的唾液标本需要送到国家实验室进行检测。

3.3.2尿液和唾液的贮存

尿液标本应当装在含有防腐剂的塑料离心管中。加有防腐剂的尿液标本可以在4－8℃下存放长达1年。供HIV检测的尿液标本不一定要冷冻贮存。

唾液标本在4－37℃环境下最多可以贮存21天（包括运输和检测的时间）。唾液标本应当冷藏运输。标本可以冷冻（－20℃）贮存有限的时间（大约6周）。一旦解冻，该标本可以再一次冻存。在检测前，先阅读检测试剂盒中附带的说明书，以了解更多具体的有关贮存的信息。

3.4 标本的编码和记录

3.4.1 标本的编码

在标本收集和处理的过程中，对含有标本的塑料管、离心管或滤纸片必须编上编码。如果使用标签，要确保标签贴在试管的侧面，而不是贴在盖子上。在标本贮存于离心管时，应该使用预先印好的、专门用于冷冻贮存的耐低温标签。监测协调员应当向负责标本收集的现场人员提供一整套的标签或不掉色的记号笔，以及供使用的编码。

对于无关联匿名检测来说，仅在试管上标上与个人身份无关联的新编码（见图2.1）。

3.4.2 标本的记录

应当准备一个专门的实验室记录本或表格，根据相应的编码记录HIV检测结果。记录本只掌握在实验室和监测人员手里，不使用时，应当安全地锁在抽屉或文件柜中以保证这些被检测者其检测结果的保密性，以及确保他们对监测活动的参与（见图2.1，2.2）。

对于无关联匿名检测来讲，在记录本或表格中仅记录新编码及其相应的HIV检测结果。 那些能够识别出受检者个人身份的信息不应记录在内。HIV检测结果可以通过新编码，以及与早期从监测表中摘录下来的人口学信息相对应（见图2.1）。

4.0 目前在监测中使用的HIV检测技术和策略

概要

目前的检测技术和策略

检测技术（EIA和快速试验）

试验的特性及应用