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SuperArray Real-Time PCR 芯片——一次实验可准确定量检测上百个基因的mRNA水平 |
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来源:检验医学专题网 加入日期:2007-12-05 |
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Real-Time芯片的引物特点: 特异性:通过BLAST等比对方法,检测确认引物在相应物种(人,小鼠或大鼠)全基因组中的高度特异性,有效避免非特异性产物产生。并通过实验证明引物不会扩增E.coli基因组中,后者是Taq DNA多聚酶的常见污染源。 均一性:所使用的引物的CG值,解链温度(Tm),以及其他一些化学的和物理的特性都相似,以保证在相同的PCR条件(尤其是退火温度)下,不同的基因都能扩增出特异性产物。 扩增效率:引物扩增的片段大小均在100到200bp左右,确保在相同的反应时间内,不同的基因均能扩增出完整片段;并增强3-引物的铆定能力,减少引物二聚体和非特异性退火的产生。
Real-Time PCR芯片的PCR反应体系特点: 热启动Taq酶:独特的经过化学修饰的热启动Taq酶,特异性高。能避免引物二聚体等的产生,还能使在较低温度下发生的非特异性引物结合无法进一步扩增。 优化的反应体系:SuperArray Real-Time PCR芯片的反应体系,最大限度减少引物二聚体的形成,并能保证最难扩增的片段都得到很高的扩增效率。
Real-Time PCR 芯片的特点 灵敏度高和线性范围广—— 起始总RNA最低只需5ng,最高可达5ug,线性范围达到105
重复性佳 ——不同研究者,不同时间,使用不同仪器,对同一标本多次实验获的均能获得一致的结果
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